詳細(xì)講解膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)原理及方法應(yīng)用

什么是膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)中的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸水溶液在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，顆粒之間因靜電作用形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，也稱金溶膠。膠體金由于具有膠體穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)強(qiáng)吸附性和高電子密度等特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而可用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中。

膠體金免疫層析技術(shù)的原理

膠體金免疫層析技術(shù)就是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學(xué)中抗原抗體能夠特異性結(jié)合原理，在層析過(guò)程中完成這一反應(yīng)，從而達(dá)到檢測(cè)的目的。膠體金免疫層析技術(shù)的原理是樣品中目標(biāo)物與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測(cè)線（T線）上偶聯(lián)抗原的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過(guò)檢測(cè)線與控制線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中目標(biāo)物進(jìn)行定性檢測(cè)。

將特異的抗體或抗原以條帶狀固定在硝酸纖維素（NC）膜上的某一區(qū)域，該區(qū)域有控制線和顯示結(jié)果的測(cè)試線，當(dāng)樣品加入膜一端（如加樣孔）時(shí)，借助毛細(xì)管作用向前移動(dòng)，樣品沿著膜運(yùn)動(dòng)到達(dá)該區(qū)域后，樣品中相應(yīng)的抗原或抗體與該抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，使該區(qū)域顯示一定的顏色，通過(guò)可目測(cè)的膠體金標(biāo)記物得到直觀的顯色結(jié)果，而流離標(biāo)記物則越過(guò)這一區(qū)域，達(dá)到自動(dòng)分離的目的。該方法用肉眼即可判讀檢測(cè)結(jié)果，可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的快速檢測(cè)。膠體金免疫層析法就是利用膠體金本身的顯色特點(diǎn)結(jié)合免疫層析技術(shù)用來(lái)診斷特異性的待測(cè)物。

膠體金免疫層析技術(shù)的方法

膠體金免疫層析當(dāng)下的檢測(cè)方法非常的多，有間接法、夾心法、雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法以及捕獲法。

1、間接法是用膠體金來(lái)標(biāo)記二抗，像是沒(méi)有標(biāo)記的特異性與已知抗原結(jié)合，間接法經(jīng)常是用在檢測(cè)血清樣本中的病毒上；

2、雙抗夾心法就是用在檢測(cè)病原微生物性的大分子抗原，早早孕試紙就是用這個(gè)方法；

3、競(jìng)爭(zhēng)法經(jīng)常用在濫用藥物、農(nóng)藥殘留食品添加劑等檢測(cè)上；

4、捕獲法是用在風(fēng)疹病毒、艾滋病等檢測(cè)

非競(jìng)爭(zhēng)性作用原理即雙抗體夾心法：

檢測(cè)試劑是一種與乳膠顆?；蚰z體金屬(一般采用膠體金)相偶聯(lián)的待測(cè)抗原的特異性配體(即抗體Abl)，所謂特異性：就是某種抗體專一性的識(shí)別結(jié)合某種抗原決定簇。它被沉積在結(jié)合墊上。當(dāng)樣品(尿、血漿、全血等)加到樣品墊后，由于毛細(xì)管作用，樣品迅速浸透結(jié)合墊，檢測(cè)試劑被溶解，并隨著樣品流沿膜條向前移動(dòng)。若樣品中存在待測(cè)抗原，它就會(huì)和檢測(cè)試劑中的抗體結(jié)合形成Ag—Abl。隨后，樣品通過(guò)固化有捕獲試劑(一般是待測(cè)抗原的另一表位特異性抗體Ab2)的測(cè)試線(testline)區(qū)域，將待測(cè)抗原一檢測(cè)試劑復(fù)合物捕獲形成Abl—Ag—Ab2復(fù)合物。樣品繼續(xù)前移，通過(guò)固化有抗Abl抗體(二抗Ab3)的質(zhì)控線(control line)區(qū)域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2復(fù)合物。這種方式通常用于檢測(cè)帶有多個(gè)抗原位點(diǎn)的分析，如絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。

競(jìng)爭(zhēng)性作用的原理：

檢測(cè)試劑仍是與乳膠顆?；蚰z體金結(jié)合的抗體(Abl)，而捕獲試劑則是待測(cè)抗原或待測(cè)抗原的模擬物。若樣品中含有待測(cè)抗原，則樣品和檢測(cè)試劑形成復(fù)合物(Ag—Abl)，即樣品中的待測(cè)抗原將檢測(cè)試劑中的抗體完全飽和。隨后在通過(guò)已固化有捕獲試劑的區(qū)域時(shí)，不再發(fā)生反應(yīng)，測(cè)試線處不顯色；樣品繼續(xù)前移。復(fù)合物(Ag—Abl)被已固化在質(zhì)控線處的抗Abl的抗體(二抗Ab2)所結(jié)合，形成Abl—Ag—Ab2復(fù)合物，使質(zhì)控線顯色。這種方式適用于檢測(cè)帶有單一抗原表位的小分子抗原，常用于違禁藥物的檢測(cè)等。

膠體金標(biāo)記技術(shù)是繼三大標(biāo)記技術(shù)（熒光抗體技術(shù)、放射免疫分析和酶免疫技術(shù)，即經(jīng)典的三大標(biāo)記技術(shù)）之后，又一較為成熟且已得到廣泛應(yīng)用的免疫標(biāo)記技術(shù)。 膠體金檢測(cè)技術(shù)以其獨(dú)特的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，該技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、觀察直觀、靈敏度高、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)在醫(yī)學(xué)、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)獸藥殘留生物學(xué)、生物芯片以及病原微生物檢測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。其穩(wěn)定性好、安全、簡(jiǎn)便，且不需任何儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，使其在多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。